علامة DYKDDDDK الأجسام المضادة وحيدة النسيلة للأرنب (ARA797)

MW المتوقعة: تعتمد على بروتين الاندماج مع علامة DYKDDDDK
الخط 1: 293 خلية مصابة بالعدوى
C - الجين الموسوم DYKDDDDK (عند التخفيف 1: 20000).
الخط 2: 293 خلية مصابة بالعدوى
N - الجين الموسوم بـ DYKDDDDK (عند التخفيف 1:10000).
لين 3: 293 خلية دون أي ترنسفكأيشن (ARA797 في التخفيف 1:2000).
المسار 4: بروتين الاندماج متعدد العلامات (عند تخفيف 1:2000)
المسار 1/2/3: 3 ميكروجرام لكل حارة
حارة 4: 20 نانوغرام لكل حارة
أب الثاني:
جار HRP(H+L) 1:5,000

تم تحصين علامة DYKDDDDK من 0.1 ملغ من 293 خلية كاملة من المحللة المنقولة بواسطة N - الجين DYKDDDDK الموسوم بـ ARA797 عند التخفيف 1:50.
أب الثاني:
GAR HRP لـ IP 1:500
المسار 1: ARA797 IP في 293 خلية كاملة من المحللة المنقولة بواسطة الجين الموسوم بـ N - الطرف DYKDDDDK
المسار 2: PBS بدلاً من ARA797 في 293 خلية كاملة من المحللة المنقولة بواسطة الجين N - الطرفي DYKDDDDK الموسوم
الخط 3: 293 خلية كاملة منقولة بواسطة الجين الموسوم بـ N - الطرف DYKDDDDK، 2 ميكروغرام (الإدخال)
التعرض: 30 ثانية

ARA797 تلطيخ علامة DYKDDDDK في 293 خلية منقولة بواسطة N - الجين DYKDDDDK الموسوم بواسطة IF / ICC (التألق المناعي / الكيمياء المناعية). تم تثبيت الخلايا باستخدام بارافورمالدهيد، وتم نفاذها بنسبة 0.1% Triton X-100 وتم حظرها باستخدام مصل الماعز بنسبة 10% لمدة نصف ساعة عند درجة حرارة الغرفة. تم تحضين العينات بالأجسام المضادة الأولية (1:10000) عند 4 درجات مئوية. تم استخدام Alexa Fluor® 488-Goat Anti-Rabbit IgG متعدد النسيلة كجسم مضاد ثانوي (1:500). تم استخدام DAPI (الأزرق) كبقعة مضادة نووية.
التحكم: PBS والأجسام المضادة الثانوية، Alexa Fluor® 488-مكافحة الماعز المترافق-Rabbit IgG (1:500).

ARA797 تلطيخ علامة DYKDDDDK في 293 خلية منقولة بواسطة الجين C - الطرف DYKDDDDK الموسوم بواسطة IF / ICC (التألق المناعي / الكيمياء المناعية). تم تثبيت الخلايا باستخدام بارافورمالدهيد، وتم نفاذها بنسبة 0.1% Triton X-100 وتم حظرها باستخدام مصل الماعز بنسبة 10% لمدة نصف ساعة عند درجة حرارة الغرفة. تم تحضين العينات بالأجسام المضادة الأولية (1:10000) عند 4 درجات مئوية. تم استخدام Alexa Fluor® 488-Goat Anti-Rabbit IgG متعدد النسيلة كجسم مضاد ثانوي (1:500). تم استخدام DAPI (الأزرق) كبقعة مضادة نووية.
التحكم: PBS والأجسام المضادة الثانوية، Alexa Fluor® 488-مكافحة الماعز المترافق-Rabbit IgG (1:500).

رسم بياني متراكب يُظهر 293 خلية منقولة باستخدام الجين الموسوم بـ N - الطرف DYKDDDDK الملون بـ ARA797 (أحمر). تم تثبيت الخلايا باستخدام بارافورمالدهيد 4% (10 دقائق) ثم تم نفاذها باستخدام 0.1% TritonX-100 لمدة 15 دقيقة. تم بعد ذلك تحضين الخلايا في الجسم المضاد (ARA797، تخفيف 1:2000) في 1x PBS/1% BSA لمدة 30 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة. كان الجسم المضاد الثانوي المستخدم هو Goat Anti-Rabbit Alexa Fluor® 488 (IgG H+L) عند تخفيف 1:2000 لمدة 20 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة. تم استخدام العينة غير المسماة (أسود) كعنصر تحكم.

رسم بياني متراكب يُظهر 293 خلية منقولة باستخدام الجين الموسوم بـ C - الطرف DYKDDDDK الملون بـ ARA797 (أحمر). تم تثبيت الخلايا باستخدام بارافورمالدهيد 4% (10 دقائق) ثم تم نفاذها باستخدام 0.1% TritonX-100 لمدة 15 دقيقة. تم بعد ذلك تحضين الخلايا في الجسم المضاد (ARA797، تخفيف 1:2000) في 1x PBS/1% BSA لمدة 30 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة. كان الجسم المضاد الثانوي المستخدم هو Goat Anti-Rabbit Alexa Fluor® 488 (IgG H+L) عند تخفيف 1:2000 لمدة 20 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة. تم استخدام العينة غير المسماة (أسود) كعنصر تحكم.